Det lokale og regionale arbejde er placeret i DOFs 12 lokalafdelinger (én i hvert amt; hovedstadsregionen dog samlet i en). De har generalforsamling hvert år, hvor alle medlemmer har stemmeret. Al arbejdet her sker på frivillig, ulønnet basis.

Lokalafdelingerne står for dels fugle- og naturbeskyttelse, dels en lang række medlemsaktiviteter for medlemmer i alle aldre, således tilbyder lokalafdelingerne henved 600 møder, ture og rejser årligt.